本標準適用于地表水、廢水中總大腸菌群和糞大腸菌群的快速測定。
本方法的檢出限為20 MPN/L。
2 術(shù)語(yǔ)和定義
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標準。
2.1 總大腸菌群 total col iforms
37℃培養,24h內能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽抱桿菌。
2.2 糞大腸菌群fecal col iforms
44.5℃培養,24h內能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽抱桿菌。
2.3 最大可能數most probable number, MPN
微生物檢驗常用發(fā)酵法,又稱(chēng)稀釋法,是一種利用統計學(xué)原理定量檢測微生物濃度的方法。它根據不同稀釋度一定體積樣品中被檢微生物存在與否的頻率,查表求得樣品中微生物的濃度,與直接報告菌落數的平板計數法不同,它最終報告的是樣品中最有可能存在的目標微生物濃度,這個(gè)以最大可能存在的濃度,就被稱(chēng)為最大可能數(most probable number,縮寫(xiě)為MPN)。
3 方法原理
按MPN法,將一定量的水樣以無(wú)菌操作的方式接種到吸附有適量指示劑(溴甲酚紫和2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC)以及乳糖等營(yíng)養成分的無(wú)菌濾紙上,在特定的溫度(37℃或44.5℃)培養24 h,當細菌生長(cháng)繁殖時(shí),產(chǎn)酸使pH值降低,溴甲酚紫指示劑由紫色變黃色,同時(shí),產(chǎn)氣過(guò)程相應的脫氫酶在適宜的pH范圍內,催化底物脫氫還原TTC形成紅色的不溶性三苯甲臜(TTF),即可在產(chǎn)酸后的黃色背景下顯示出紅色斑點(diǎn)(或紅暈)。通過(guò)上述指示劑的顏色變化就可對是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作出判斷,從而確定是否有總大腸菌群或糞大腸菌群存在,再通過(guò)查MPN表就可得出相應總大腸菌群或糞大腸菌群的濃度值。
4 試劑和材料
除非另有說(shuō)明,分析時(shí)均使用符合國家標準的分析純化學(xué)試劑。
4.1 市售水質(zhì)總大腸菌群和糞大腸菌群測試紙片:10 ml水樣量紙片、1ml水樣量紙片按以下方法進(jìn)行質(zhì)量鑒定,達到要求后方可使用。
(1) 外層鋁箔包裝袋應密封完好,內包裝聚丙烯塑膜袋無(wú)破損。
(2) 紙片外觀(guān)應整潔無(wú)毛邊,無(wú)損壞,呈均勻淡黃綠色,加去離子水或蒸餾水后呈紫色,無(wú)論加水與否,應無(wú)雜色斑點(diǎn),無(wú)明顯變形,表面平整。
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