本標準規定了大型真菌多樣性觀(guān)測的主要內容、技術(shù)要求和方法。
本?標準適用于中華人民共和國范圍內大型真菌多樣性的觀(guān)測。
本標準內容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用 于本標準。
GB/T 7714 文后參考文獻著(zhù)錄規則
GB/T 8170 數值修約規則與極限數值的表示和判定
HJ 623 區域生物多樣性評價(jià)標準
HJ 628 生物遺傳資源采集技術(shù)規范（試行）
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標準。
3.1
真菌 fungi
指行吸收營(yíng)養、具細胞壁、能產(chǎn)孢、無(wú)葉綠素、以有性或無(wú)性?xún)煞N方式繁殖的真核有機體。
3.2
大型真菌 macrofungi
泛指所有能夠形成肉眼可見(jiàn)的子實(shí)體的真菌。
3.3
盤(pán)菌 cup fungi
指有性階段形成子囊盤(pán)的子囊菌，包括絕大多數肉眼可見(jiàn)的子囊菌，其子囊果為杯狀、盤(pán)狀、鐘狀、馬鞍狀、舌狀、羊肚狀等。
3.4
地下真菌 hypogeous fungi
指子實(shí)體整個(gè)生長(cháng)過(guò)程都在地表以下的大型真菌，包括子囊菌和擔子菌的部分種類(lèi)。
3.5
外生菌根真菌 ectomycorrhizal fungi
指與木本植物根系形成外生菌根共生關(guān)系的一些大型真菌，絕大多數為擔子菌，少數為子囊菌。
4.1 科學(xué)性原則
觀(guān)測樣地和觀(guān)測對象應具有代表性，能全面反映觀(guān)測區域大型真菌的整體狀況；應采用 統一、標準化的觀(guān)測方法，能觀(guān)測到大型真菌群落和物種多樣性的動(dòng)態(tài)變化。
4.2 可操作性原則
觀(guān)測方案應考慮所擁有的人力、資金和后勤保障等條件，確保觀(guān)測工作切實(shí)可行。應采 用效率高、成本低的觀(guān)測方法。
4.3 持續性原則
觀(guān)測工作應滿(mǎn)足生物多樣性保護和管理的需要，并能對生物多樣性保護和管理起到指導 及預警作用。觀(guān)測樣地、樣線(xiàn)和樣方一經(jīng)確定，不得隨意改動(dòng)。
4.4 保護性原則
大型真菌對其所處生態(tài)系統的形成、演化和穩定發(fā)揮著(zhù)重要作用，任何對大型真菌的破 壞行為都不可避免地給整個(gè)生態(tài)系統造成不良影響。應做到不破壞樣地內部及周邊的大型真 菌和其他物種及其生境，避免超出客觀(guān)需要的頻繁觀(guān)測。
4.5 安全性原則
觀(guān)測具有一定的野外工作特點(diǎn)。觀(guān)測者應接受相關(guān)專(zhuān)業(yè)培訓，做好防護措施。
5.1 觀(guān)測準備
5.1.1 組建和培訓觀(guān)測隊伍
成立觀(guān)測小組，明確觀(guān)測者的責任，對觀(guān)測者進(jìn)行培訓，使觀(guān)測者掌握野外觀(guān)測方法、 物種識別知識和野外生存技巧。
5.1.2 收集資料
收集觀(guān)測區域氣候、地理和植被等自然環(huán)境的資料，掌握常見(jiàn)大型真菌和植物的分布及 識別知識，準備觀(guān)測區域高分辨率地形圖。
5.1.3 觀(guān)測儀器和工具
包括長(cháng)卷尺、標樁、采集袋、采集刀、數碼相機、全球定位系統（GPS）定位儀、海拔 儀、觀(guān)測記錄表、記錄筆、防蚊罩、防蚊藥、大型真菌鑒定手冊等。
5.2 觀(guān)測對象
觀(guān)測對象主要為具有重要經(jīng)濟、生態(tài)價(jià)值和受威脅的大型真菌。包括可食用、藥用及有 毒的種類(lèi)，與樹(shù)木共生的外生菌根真菌，降解植物殘體的腐生大型真菌，以及一些寄生于動(dòng) 植物、依靠寄主營(yíng)養的種類(lèi)等。
5.3 樣地設置
5.3.1 代表性樣地法
在觀(guān)測區域內，選取物種種類(lèi)和數量均較為豐富的地點(diǎn)，但其觀(guān)測結果不能準確反映整 個(gè)觀(guān)測區域的情況，也不能用于統計分析。
5.3.2 隨機抽樣法
將觀(guān)測區域劃分為若干樣地。每個(gè)樣地內劃分為許多固定面積的樣方并編號，然后用 Fisher的隨機數字表進(jìn)行隨機取樣，通常采用不放回的方法。當樣地地形復雜、到達取樣地 點(diǎn)耗時(shí)較長(cháng)、大型真菌分布不均勻等因素會(huì )對結果造成影響時(shí)，采用分層隨機抽樣法。
5.3.3 分層隨機抽樣法
根據生境類(lèi)型、氣候、海拔、土地利用類(lèi)型或物種豐富度等因素進(jìn)行分層。
5.4 野外采樣
5.4.1 子實(shí)體顯見(jiàn)的地生大型真菌采樣
5.4.1.1 這種方法主要適用于地表子實(shí)體顯見(jiàn)的大型真菌的抽樣觀(guān)測。
5.4.1.2 在所選的樣地內設置若干條樣線(xiàn)，樣線(xiàn)不一定是直線(xiàn)。樣線(xiàn)應覆蓋樣地內主要生境 類(lèi)型，每種生境類(lèi)型至少有 2 條樣線(xiàn)，每條樣線(xiàn)至少保持 50 m 距離，每條樣線(xiàn)長(cháng)度在 0.5～ 1 km。用 GPS 定位儀定位樣線(xiàn)起點(diǎn)和終點(diǎn)坐標，在 1:100000 地圖上標注樣線(xiàn)。
5.4.1.3 沿著(zhù)樣線(xiàn)，每隔 20 m 設置一個(gè)半徑 1.26 m、面積 5 m2 的圓形樣方，使每種生境類(lèi)型的樣方數量達 50 個(gè)左右。樣方內生境必須盡可能同質(zhì)。用一定標志標明樣方的位置。
統計所選樣方中地表大型真菌的種類(lèi)、個(gè)體數量（樣方記錄表參見(jiàn)附錄 A）。對于無(wú)法鑒別種類(lèi)的大型真菌，記錄其新鮮時(shí)的特征，拍攝原生境中子實(shí)體的照片，采集少量子 實(shí)體，將其進(jìn)行編號后，放入相應的標本袋內，帶回室內鑒定并完善觀(guān)測記錄。樣本采集按 HJ 628 的規定執行。
5.4.1.5 在進(jìn)行樣方采樣時(shí)，應同時(shí)拍攝樣方原生境照片，并詳細記錄采集日期、地點(diǎn)、海拔、生態(tài)特征（如著(zhù)生基質(zhì)、周?chē)脖?、共生生物等）、采集人等?/span>
5.4.2 子實(shí)體較小種類(lèi)的樣方取樣
5.4.2.1 這種方法主要適合于子實(shí)體較小種類(lèi)的觀(guān)測（如子囊菌中的一些盤(pán)菌等）。
5.4.2.2 樣地每年至少抽樣兩次，一般在子實(shí)體發(fā)生季節的中間和末尾進(jìn)行。樣本采集按HJ 628 的規定執行。
5.4.2.3 在靠近 5.4.1 中大型真菌樣方的附近建立樣方。
5.4.2.4 以 0.56 m 為半徑，建立 1 m2 的圓形樣方，以 1 周內可完成抽樣調查為標準，確定樣方數目。
5.4.2.5 統計所選樣方中子實(shí)體較小真菌的種類(lèi)、個(gè)體數量，少量采集樣方內各種該類(lèi)真菌 物種子實(shí)體用于鑒定，操作方法同 5.4.1.4，同時(shí)按 5.4.1.5 記錄相關(guān)信息。
5.4.3 木生大型真菌采樣
5.4.3.1 按照 5.4.1.2 設置樣線(xiàn)，沿著(zhù)樣線(xiàn)，每隔 20 m 設置一個(gè)半徑 2.52 m、面積 20 m2 的圓形樣方，使每種生境類(lèi)型的樣方數量達 50 個(gè)左右。
5.4.3.2 每個(gè)樣方中用一彩色的塑料標牌標記并編號，在地圖上標記其位置。樣方內被調查 的圓木（立木和倒木）直徑需超過(guò) 1 cm。
5.4.3.3 統計每個(gè)樣方內生長(cháng)的木生大型真菌種類(lèi)和個(gè)體數（記錄表參見(jiàn)附錄 B），并記錄其基物樹(shù)木的種類(lèi)、直徑和長(cháng)度。對于無(wú)法鑒別種類(lèi)的大型真菌，操作方法同 5.4.1.4，同時(shí)按 5.4.1.5 記錄相關(guān)信息。
5.4.4 瀕危大型真菌采樣
5.4.4.1 在所選樣地內有瀕危大型真菌分布的地塊上，設置若干 10 m×10 m 的樣方。
5.4.4.2 統計樣方內瀕危大型真菌的種類(lèi)和個(gè)體數（記錄表參見(jiàn)附錄 C）。采集大小適中的個(gè)別子實(shí)體，對其稱(chēng)重，用于推測樣方內該物種子實(shí)體的生物量，或通過(guò)以往年份采集子實(shí) 體樣品重量推測其生物量。樣本采集按 HJ 628 的規定執行。同時(shí)按 5.4.1.5 記錄相關(guān)信息。
5.5 標品制備、保存和鑒定
5.5.1 大型真菌標本制備和保存
采集的標本應及時(shí)分離菌種或制作用于提取DNA 的組織塊。標本用烘干箱在 40～45 ℃ 溫度下及時(shí)烘干。含水量較多且個(gè)體較大標本烘干時(shí)需要剖開(kāi)、切成薄片后烘干。烘干的標 本在自然條件下冷卻至室溫，置于-40℃以下的冰柜中冷凍，大多數標本通常冷凍 10～15 天，個(gè)別體積較大標本（如子實(shí)體直徑或最大徑超過(guò) 30 cm，或厚度超過(guò) 5 cm）的冷凍時(shí)間應延長(cháng)至 20～30 天。冷凍后的標本保存在標本館等適宜場(chǎng)所。
5.5.2 用于提取 DNA 的組織塊的制備和保存
用解剖刀或鑷子從子實(shí)體上選取色澤較淺且較為干凈的組織，用干凈的吸水紙包裹后， 放入裝有變色硅膠的封口袋中干燥處理。及時(shí)更換變色硅膠，獲得完全干燥的樣品，將其保存在放有少量變色硅膠的自封袋內，并避開(kāi)高溫高濕的環(huán)境。
5.5.3 大型真菌子實(shí)體的形態(tài)鑒定
對標本的宏觀(guān)和微觀(guān)形態(tài)特征以及化學(xué)顯色反應進(jìn)行觀(guān)察和描述，條件允許的情況下進(jìn) 行顯微鏡拍攝或繪圖，參照可靠的大型真菌鑒定手冊和權威文獻的描述，依據形態(tài)特征對大 型真菌子實(shí)體進(jìn)行鑒定。
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