GB/T 24800.3-2009 化妝品中螺內酯、過(guò)氧苯甲酰和維甲酸的測定 高效液相色譜法

4.1 液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器。

4.2 微量進(jìn)樣器,10μL,

4.3 超聲波清洗器。

4.4 離心機，大于5 000 r/min,

4.5 溶劑過(guò)濾器和0.45μm有機過(guò)濾膜。

4.6 具塞比色管，10 mL。

5 測定步驟

5.1 樣品處理

      稱(chēng)取化妝品試樣約0.2g,精確到0.001g,于10 mL具塞比色管中，加人8mL甲醇，在超聲波清洗器中超聲振蕩20min，冷卻后用甲醇稀釋至刻度，混勻。取部分溶液放人離心管中，在離心機上于 5000r/min離心20min，離心后的上清液經(jīng)0.45μm有機濾膜過(guò)濾，濾液待測定用。

5.2 測定

5.2.1 色譜條件

5.2.1.1 色譜柱：Kromasil C₁₈柱（250 mm×4.6mm內徑,5μm);

5.2.1.2 流動(dòng)相：A：甲醇,B:0.025mol/L磷酸二氫鈉溶液（pH 6.5)(3.9),梯度洗脫條件見(jiàn)表1。 

表1方法的梯度洗脫條件

5.2.1.3 流速：1.0 mL/min;

5.2.1.4 柱溫：25℃；

5.2.1.5 檢測波長(cháng)：0~9.50 min,240nm,9. 51 min~13 min,335nm;

5.2.1.6 進(jìn)樣量:10 μL。

5.2.2 標準工作曲線(xiàn)繪制

      分別移取一系列濃度為1 mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、 20 mg/L、 50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的混合標準工作溶液，按色譜條件（5.2.1)進(jìn)行測定，以色譜峰的峰面積為縱坐標，對應的溶液濃度為橫坐標作圖，繪制標準工作曲線(xiàn)。

      標準物質(zhì)色譜圖參見(jiàn)附錄A的圖A.1。

5.2.3 試樣測定

      用微量注射器準確吸取試樣溶液（5. 1)注入液相色譜儀，按色譜條件（5.2.1)進(jìn)行測定，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰面積，由色譜峰的峰面積可從標準曲線(xiàn)上求出相應的被測物濃度。樣品溶液中的被測物的響應值均應在儀器測定的線(xiàn)性范圍之內。被測物含量高的試樣可取適量試樣溶液用流動(dòng)相稀釋后進(jìn)行測定。

5.2.4 定性確認

      液相色譜儀對樣品進(jìn)行定性測定，進(jìn)行樣品測定時(shí)，如果檢出螺內醋、過(guò)氧苯甲酞或維甲酸的色譜峰的保留時(shí)間與標準品相一致，并且在扣除背景后的樣品色譜圖中，該物質(zhì)的紫外吸收圖譜與標準品的紫外吸收圖譜相一致，則可初步判斷樣品中存在螺內酯、過(guò)氧苯甲?；蚓S甲酸。必要時(shí)，陽(yáng)性樣品需用

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